期刊简介
本刊主要刊登有关国内外人体微生态学、动植物微生态学及分子水平的微生态学等各领域的基础研究、应用研究、发展动态、成果和技术方法，包括生态制品（人用、兽用、水产、环境等）的研究、正常微生物群与微环境的平衡关系以及微生态失调造成疾病的防治研究、实验室技术等，以及促进微生态学与生命科学各学科相关领域的学术交流。
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首页>中国微生态学杂志
- 杂志名称：中国微生态学杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会 大连医科大学
- 国际刊号：1005-376X
- 国内刊号：21-1326/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中华预防医学会优秀期刊期刊收录：万方收录(中), 文摘杂志, Pж(AJ) 文摘杂志(俄), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, SA 科学文摘(英), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 哥白尼索引(波兰), 维普收录(中)
肺炎克雷伯菌CS309耐药基因检测和NDM-1基因的克隆及原核表达
邬靖敏；邹明祥；王海晨；李军
关键词：新德里金属β-内酰胺酶1型, 肺炎克雷伯菌, 克隆, 融合蛋白
摘要：目的 检测产NDM-1肺炎克雷伯菌CS309是否同时携带产IMP、VIM型金属β-内酰胺酶或KPC型碳青霉烯酶的耐药基因,同时构建NDM-1基因原核表达质粒,并在大肠埃希菌中进行表达.方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增IMP、VIM和KPC耐药基因;以产NDM-1肺炎克雷伯菌CS309为DNA模板,PCR扩增NDM-1全长,并将其与pGEM-T克隆载体连接后转化至大肠埃希菌DH5α,继而对阳性克隆进行双酶切,将酶切片段与pET-28α(+)表达载体连接,并转化大肠埃希菌BL21,再用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,并采用SDS-PAGE和Western blot技术验证NDM-1蛋白.结果 经PCR和测序证实,该菌同时携带NDM-1和IMP-4两种金属酶基因,未扩增出VIM、KPC耐药基因.经双酶切和测序证实,原核表达质粒pET-28α(+)-NDM-1构建成功.SDS-PAGE发现,重组菌株经诱导后在28 kDa附近有明显条带,与预期蛋白大小27.9 kDa一致.Western blot表明诱导产生的融合蛋白可与NDM-1抗体特异性结合.结论 肺炎克雷伯菌CS309同时携带NDM-1和IMP-4两种金属酶基因;成功构建了NDM-1基因的原核表达质粒,该质粒在大肠埃希菌BL21中高效融合表达.
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