期刊简介
本刊主要刊登有关国内外人体微生态学、动植物微生态学及分子水平的微生态学等各领域的基础研究、应用研究、发展动态、成果和技术方法，包括生态制品（人用、兽用、水产、环境等）的研究、正常微生物群与微环境的平衡关系以及微生态失调造成疾病的防治研究、实验室技术等，以及促进微生态学与生命科学各学科相关领域的学术交流。
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首页>中国微生态学杂志
- 杂志名称：中国微生态学杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会 大连医科大学
- 国际刊号：1005-376X
- 国内刊号：21-1326/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中华预防医学会优秀期刊期刊收录：万方收录(中), 文摘杂志, Pж(AJ) 文摘杂志(俄), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, SA 科学文摘(英), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 哥白尼索引(波兰), 维普收录(中)
拟态弧菌VMH蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备
肖宁；曹际；孔令严；周昊；陶会竹；陶丽寒；李槿年
关键词：拟态弧菌, VMH蛋白, 原核表达, 多克隆抗体
摘要：目的 实现拟态弧菌热不稳定性溶血素(VMH)的原核表达,制备兔抗VMH蛋白的多克隆抗体.方法 根据GenBank上已有的拟态弧菌vmh基因序列,设计并合成引物,通过PCR方法扩增vmh基因.PCR纯化产物酶切后,定向插入到PET-32a表达载体构建重组表达质粒PET-32a-vmh.重组表达质粒转化至E.coli Rosetta感受态细胞,在IPTG诱导下进行VMH蛋白表达.SDS-PAGE分析重组VMH蛋白(rVMH)的表达形式,并分别采用兔血平板扩散法和Western blot检测其溶血活性和免疫反应性.用纯化的rVMH蛋白免疫新西兰大白兔,3次免疫后采集免疫血清,采用饱和硫酸铵分级沉淀结合亲和层析法纯化多克隆抗体,并检测其纯度与效价.结果 重组表达质粒PET-32a-vmh诱导表达后,经SDS-PAGE分析发现分子量约为77.8 kDa的rVMH蛋白主要以包涵体形式表达,该蛋白经变性复性后具有溶血活性和免疫反应性.兔抗rVMH蛋白的多克隆抗体经纯化后,其纯度达95％,ELISA效价为1∶26843545600,琼扩效价为1∶32.结论 成功制备了rVMH蛋白及其多克隆抗体,为进一步采用噬菌体肽库筛选技术鉴定VMH蛋白表位提供了物质基础.
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