期刊简介
本刊主要刊登有关国内外人体微生态学、动植物微生态学及分子水平的微生态学等各领域的基础研究、应用研究、发展动态、成果和技术方法，包括生态制品（人用、兽用、水产、环境等）的研究、正常微生物群与微环境的平衡关系以及微生态失调造成疾病的防治研究、实验室技术等，以及促进微生态学与生命科学各学科相关领域的学术交流。
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首页>中国微生态学杂志
- 杂志名称：中国微生态学杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会 大连医科大学
- 国际刊号：1005-376X
- 国内刊号：21-1326/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中华预防医学会优秀期刊期刊收录：万方收录(中), 文摘杂志, Pж(AJ) 文摘杂志(俄), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, SA 科学文摘(英), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 哥白尼索引(波兰), 维普收录(中)
建立转酮酶酶活测定方法及应用
李胜营；朱欣娜；毛小琴
关键词：转酮酶, 酶活测定, 木酮糖激酶
摘要：目的 转酮酶是非氧化磷酸化戊糖途径中的关键酶.5-磷酸木酮糖是分析测定转酮酶酶活性的底物,然而因该底物难以化学合成,生产成本高,从而导致厂家停止生产,目前市场上无法得到.因此有必要建立起新的转酮酶酶活测定方法.方法 (1)将酿酒酵母的木酮糖激酶基因(XKS1)克隆于pET30a载体.(2)纯化木酮糖激酶.(3)建立酶偶联反应,以木酮糖为底物,将其转化为5-磷酸木酮糖,用于转酮酶酶活的测定.结果 (1)成功地将XKSI基因克隆于pET 30a得到质粒pXZ-X004.(2)质粒pXZ-X004诱导表达产生C端His-tag标签的XK,用Ni柱分离得到纯化的木酮糖激酶(XK).(3)纯化的XK活性为21.0 U/mg protein,当用12.5％的甘油保存于-80℃环境1个月,仍有74％的活性.(4)用纯化的XK建立了转酮酶(TK)酶活测定新方法,当TK酶活低至0.008 75 U时仍能够利用新方法检测.结论 本实验通过克隆和表达XKS1基因,成功地建立了TK酶活性测定的新方法,并应用于木糖代谢工程菌株TK酶活的测定,为医学和生态学领域中TK酶活的分析奠定了基础.
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